Описание

Задание:

Блок II. Отразите основные пути метаболизма кокаина. Поясните стадии метаболизма.

Блок II. Отразите основные пути метаболизма кокаина. Поясните стадии метаболизма.

Блок VI.

Задача 1. При изолировании из 100 г биологического объекта общим методом Стаса-Отто (изолирование спиртом, подкисленным щавелевой кислотой) получено хлороформное извлечение (фракция А). С помощью ТСХ и качественных химических реакций был обнаружен промедол. Какие условия хроматографирования должны быть соблюдены (используемая пластина, возможные системы растворителей, состав метчика/стандарта, детекторы/определяющие реагенты), если в результате на хроматограмме в исследуемой зоне обнаружено пятно красно-оранжевого цвета с величиной Rf — 0,66.

Решение:

Блок V. Составьте примерный план анализа при отравлении диазепамом.

Ответ:

Объектами являются печень, почки, кровь, моча, желудок, тонкий кишечник, если препарат был принят перорально. Пробы мочи и крови следует консервировать натрия фторидом или борной кислотой, добавлять буферные растворы в связи с чувствительностью к изменению рН и микробной контаминации, хранить в холодном месте. Для хранения проб желательны полипропиленовые емкости, стеклянные емкости необходимо силилировать.

Выделяют два основных направления анализа по продуктам гидролиза и по нативному диазепаму и его метаболитам. Первое направление предусматривает кислотный гидролиз (соляная кислота при Т = 140-145°С) диазепама и его метаболитов после предварительной экстракции методами жидкость-жидкостной экстракции (ЖЖЭ) (метанол и боратный буфер рН=9) или твердофазной экстракции (ТФЭ) после подщелачивания до рН = 9 на патронах диапак карбокси, Clean Screen.

Второе направление включает изолирование нативных соединений и ряда гидрофобных метаболитов экстракцией подкисленной водой с последующим концентрированием с помощью ЖЖЭ или ТФЭ (системы те же). Для биологических жидкостей используется экстракция органическими растворителями при значении рН = 6-8 (изоэлектрическая точка). Преимущество отдается исследованию по продуктам гидролиза в связи с их большим количеством в анализируемой крови.

К 5 мл крови прибавляют равный объем фосфатного буферного раствора (рН = 7,0). Полученную жидкость 2 раза по 5 мин взбалтывают с новыми порциями диэтилового эфира. Объем диэтилового эфира, применяемого для взбалтывания, должен быть равным объему водной фазы. Соединенные эфирные вытяжки дважды взбалтывают с 0,1 н. раствором гидроксида натрия (по 2 мл), а затем с 2 мл воды. После отделения водной фазы эфирную вытяжку взбалтывают с 3 мл 2 н. раствора соляной кислоты в течение 10 мин, а затем от эфирного слоя отделяют солянокислую вытяжку. Оптическую плотность этой вытяжки измеряют в диапазоне длин волн от 200 до 300 нм.

Параллельно измеряют оптическую плотность диазепама, обработанного указанным выше способом. Наличие максимумов поглощения при 242 нм указывает на наличие диазепама в крови.

Методы предварительного анализа

— Иммунохимические методы

— Тонкослойная хроматография

ТСХ анализ с использованием силикагеля G на высушенных стеклянных пластинах, элюентом является система А: хлороформ-ацетон 40:20,В: хлороформ-метанол 90:10, С: циклогексан-толуол-диэтиламин 75:15:10. Детектируют при длине волны 245 нм затем обрабатывают 2н серной кислотой и нагревают до 80 градусов, детектируют при длине волны 366 нм, проявляют подкисленным йодоплатинатом калия. Фактор удерживание в разных системах элюэнтов Rfa = 70, Rfb = 87, Rfc = 30.

— Реакция Браттона — Маршалла

Обнаружение диазепама методом хроматографии в тонком слое сорбента. Для обнаружения диазепама и других производных бензодиазепина с помощью этого метода применяют пластинки, покрытые тонким закрепленным слоем силикагеля КСК или пластинки «силуфол». В качестве системы растворителей применяют смесь этилацетата, 25 %-го раствора аммиака и метилового спирта (26 : 1,6 : 3,3) или смесь хлороформа и ацетона (9: 1). Пятна на пластинках проявляют с помощью реактива Драгендорфа.

Обнаружение диазепама по УФ- и ИК-спектрам. Диазепам в 2 н. растворе соляной кислоты имеет максимумы поглощения при 242 и 287 нм, в 0,1 н. растворе серной кислоты имеет максимумы поглощения при 241, 284 и 359 нм; в ИК-области спектра диазепам (диск с бромидом калия) имеет основные пики при 1681, 1484 и 1313 см.

Методы подтверждающего анализа

— Проведение газохроматографического анализа (ГЖХ).

Хроматографическое разделение осуществляют с применением термоионного (ТИД) и электронно-захватного детекторов (ЭЗД) на кварцевых капиллярных колонках с полярными или слабополярными неподвижными фазами: 5% фенилдиметилсиликон (фаза НР-5 или НР-5MS). Наиболее чувствительным является ЭЗД. Температурные режимы термостата колонок программируются с начальной температурой 150°С (1 мин) до конечной 250°С (5 мин) со скоростью 20°С/мин. Температура инжектора соответственно поддерживается на уровне 250°С. В качестве газа-носителя используют гелий. При проведении ГЖХ-анализа с ЭЗД в качестве внутреннего стандарта используется диметилброманалин, с ТИД — дифениламин.

— Газовая хроматография с масс-селективным детектированием (ГХ/МС).

Неподвижные фазы и температурные программы аналогичны ГЖХ. При определении диазепама регистрируют две группы ионов: 1 группа — 242, 207, 270 m/z — для внутреннего стандарта; 2 группа — 256, 221,284 m/z — для анализируемого вещества. В качестве внутреннего стандарта используют мезапам. Предел обнаружения диазепама составляет 0,5 нг/мл.

— Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ).

Для обнаружения диазепама с помощью ВЭЖХ рекомендуются следующие условия: обращено-фазные сорбенты С18 («Сепарон», «Zorbax»), С8 , подвижная фаза — смесь 0.05 М раствора аммония гидрофосфата и ацетонитрила (65:35) для разделения нативных 1,4 — бензодиазепинов и система тех же растворителей в соотношении 45:55 для аминобензофенонов; режим элюирования — градиентный. Детектирование нативных 1,4- бензодиазепинов проводится при длине волны 230 нм, аминобензофенонов и мезапама — при 220 нм. Предел обнаружения диазепина 15,0 * 10^-6 , мг.

Список используемой литературы:

1. Белова А.В. Руководство к практическим занятиям по токсикологической химии. — М.: Медицина, 1976. — 232 с.

2. Крамаренко В.Ф. Токсикологическая химия. Киев: Вища школа, 1989. – 447 с.

3. Плетенева Т.В. Токсикологическая химия. М.: ГЭОТАР – Медиа, 2005. – 512 с.

4. Швайкова М.Д. Токсикологическая химия. — М.: Медицина, 1975. – 376 с.

5. Крамаренко В.Ф., Туркевич Б.М. Анализ ядохимикатов. Уч.пособ. – М.: Химия, 1978. – 264 с.

6. Куклин В.Н. и др. Токсикологическая химия. Уч.пособ. – СПб., 2002.

7. Куценко С.А. Основы токсикологии. Спб.: Фолиант, 2004.

8. Лужников Е.А. Клиническая токсикология. Уч.пособ. – М.: Медицина, 1999. – 416 с.

9. Основы аналитической токсикологии. Фланаган Р. Дж. и др. – М.: Медицина, 1997.

10. Руководство к практическим занятиям по токсикологической химии. Уч.пособ. – М., 1983. – 64 с.

11. Трахтенберг И.М. Книга о ядах и отравлениях. Очерки токсикологии. Киев, Наукова думка, 2000.

12. Шаталаев И.Ф. и др. Химико-токсикологический анализ «летучих» и «лекарственных» ядов. Уч.пособ. – Самара, 2004.

В целях сохранения высокой уникальности текста фрагмент работы выложен частично.

После оплаты Вам откроется доступ к полному ответу.

10 стр.