Фрагмент

Клеточная инженерия и использование ее методов в создании микроорганизмов и клеток растений — новых продуцентов биологически активных (лекарственных) веществ.

Основой клеточной инженерии является гибридизация соматических клеток — слияние неполовых клеток с образованием единого целого. Слияние клеток может быть полным или же клетка- реципиент может приобрести отдельные части клетки-донора: цитоплазму, митохондрии, хлоропласты, ядерный геном или его крупные блоки. Введение небольших блоков генетической информации обычно осуществляется средствами генетической инженерии. Соматическая гибридизация имеет более широкие возможности для скрещивания филогенетически отдаленных организмов, чем половое скрещивание, при котором Природа допускает лишь строго определенные сочетания родительских форм. Этапы получения гибридных клеток. Слиянию клеток предшествует установление тесного контакта между плазматическими мембранами. Этому препятствует наличие поверхностного заряда на природных мембранах, обусловленного отрицательно заряженными группами белков и липидов. Деполяризация мембран переменным электрическим или магнитным полем, нейтрализация отрицательного заряда мембран с помощью катион способствует слиянию клеток. На практике широко используются ионами Са2+, хлорпромазинон. Эффективным «сливающим» (фузогенным) агентом служит полиэтиленгликоль. .[2]

По отношению к животным клеткам применяют также вирус Сендай, действие которого как сливающего агента, по-видимому, связано с частичным гидролизом белков цитоплазматической мембраны. Участок субъединицы вируса обладает протеолитической активностью. Растительные, грибные и бактериальные клетки перед слиянием освобождают от клеточной стенки, при этом получаются протопласты. Клеточную стенку подвергают ферментативному гидролизу, применяя лизоцим (для бактериальных клеток), зимолиазу улитки (для клеток грибов), комплекс циллюлаз, гемицеллюлаз и пектиназ, продуцируемый грибами (для клеток растений). Набухание и последующее разрушение протопластов предотвращается созданием повышенной осмолярности среды. Подбор гидролитических ферментов и концентрации солей в среде с целью обеспечения максимального выхода протопластов представляет собой сложную задачу, решаемую в каждом случае отдельно. Для скрининга полученных гибридных клеток используют различные подходы: 1) учет фенотипических признаков; 2) создание селективных условий, в которых выживают лишь гибриды, объединившие геномы родительских клеток. Возможности метода слияния клеток. .[7]

Метод слияния соматических клеток открывает перед биотехнологией значительные перспективы:

1. Возможность скрещивания филогенетически отдаленных форм живого. Путем слияния клеток растений…………………….